L'humour se nourrit de références culturelles, dont la grande variété permet à la série de toucher le plus large public. Celles-ci appartiennent souvent aux univers du cinéma, de la télévision, de la musique, de la littérature, de la science ou de l'histoire. Les animateurs ajoutent régulièrement blagues et autres gags visuels au second plan via des bouts de texte humoristique ou absurde sur des panneaux, des journaux etc. Souvent, le public ne repère pas ces gags à la première diffusion de l'épisode.

La série utilise les « tics de langage » et beaucoup de personnages en ont au moins une chacun, comme le célèbre « D'oh! » d'abattement d'Homer Simpson, l'« Excellent... » de Charles Montgomery Burns ou encore le « Ha-ha ! » moqueur de Nelson Muntz. Celles de Bart, telles que « ¡Ay, caramba! », « ¡No problemo! » et « Va te faire shampooiner ! » (en France ; « Mange de la crotte » au Québec ; « Eat my shorts » en version originale), furent imprimées sur t-shirt aux débuts de la série. Cependant, Bart a rarement utilisé ces deux dernières phrases après qu'elles furent devenues populaires. L'épisode Bart devient célèbre tourne même en ridicule l'humour fondé sur de telles répétitions.